藥品研發中熱電色譜柱的選擇和流動相的優化
更新更新時間：2020-03-18
瀏覽次數：3819
分析方法的開發主要包括熱電色譜柱的選擇、流動相的選擇、檢測波長的選擇和梯度的優化幾個方面。目前高效液相色譜法(HPLC)多使用反相色譜法，本文主要以反相為例講解。
1.熱電色譜柱的選擇
原料藥生產對產品的純度和雜質含量的要求非常苛刻，要求檢測使用的熱電色譜柱有較高的理論塔板數，能提供更好的分離度，從而對可能存在的雜質有更大的分離的可能性，所以5um填料的色譜柱長要250mm，3.5um填料的柱長要150mm，基本上都是各個粒徑柱長長的。喜歡近兩年新出的亞二微米填料的色譜柱，50mm柱長就能提供很高的理論塔板數，而且柱長和粒徑小了，流速增加很多，能節省很多的分析時間，極大的提高工作效率。一般選用直徑為4.6mm或3.0mm的柱子，太細了可能會增大柱外效應。填料的孔徑對于小分子合成藥物不需要考慮，普通的分析柱都在100A左右，能滿足分析檢測的需要。對于API分析方法開發，一般要求必須做色譜柱的篩選實驗，少使用三種不同類型的色譜柱，每種類型三只，要來自于不同廠家。
三種類型包括：1)普通的C18或相應的C8色譜柱，如Waters的SymmetryC18或C8，YMC的PackProC18或C8，Agilent的RXC8等，其它公司如菲羅門和熱電也有相應的色譜柱；
2)封端處理的或者極性嵌入型色譜柱，如Waters的SymmetryShieldRP18或RP8，XTerraRP18或RP8，YMC的ODSAQ，Agilent的ZorbaxSBAQ等，其它公司如菲羅門和熱電也有相應的色譜柱；
3)填料用其它官能團修飾過的色譜柱，如氨基柱、氰基柱、苯基柱等。一般不同類型的色譜柱在選擇性上會有很大的差異，相同類型的色譜柱生產廠家不同在選擇性上也會有差異，這個主要是填料的性質和生產工藝決定的，有時候用一只色譜柱分離不好，除了優化梯度和流動相外，換一個廠家的柱子也是一個很好的選擇。
相同品牌型號的色譜柱，C18和C8在選擇性上沒有差異，但是C18保留能力更強，相同的樣品分離度更高，我們一般傾向于選擇用C18。我們在篩選色譜柱時盡量選擇行業內*幾位的廠家，柱子品質好，開發分析方法時能省很多力氣，做出來的分析方法也有保證。一個藥從開發到上市可能會持續十幾年甚至更長時間，廠家有實力，開發方法時選定的柱子在若干年以后需要時還會有的買，做分析時重復性也能保障。多用幾只色譜柱做篩選和分析方法優化，能盡大的可能提高分析方法的質量，保證檢測結果的可信度。
常用的柱子有：Agilent的ZorbaxEclipseXDB-C18、ZorbaxEclipsePlusC18，Waters的SymmetryC18、XTerraRP18、XTerraMSC18等，YMC的柱子有時會是不錯的備用選擇，菲羅門的柱子菲羅門的柱子國內外*較高，但是感覺柱子壓力高，壽命短，盡量不用，熱電的柱子用的也不少，但沒什么感覺。制劑分析方法選擇色譜柱的要求基本和API相一樣，對于中間體和生產過程中反應跟蹤(IPC)分析方法開發使用的色譜柱，一般會根據樣品性質直接選取一兩只普通C18或者封端處理過的色譜柱，簡化篩選過程。
