生物發(fā)光技術(shù)

生物發(fā)光技術(shù)
                                                       上海連橋生物科技有限公司
                      原理

生物發(fā)光是生物體內(nèi)一種特定酶催化，將生物化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象。生物發(fā)光技術(shù)通過將熒光酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA中以表達(dá)熒光素酶，然后培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)后，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其第五熒光素（luciferin），在生物體內(nèi)環(huán)境中三磷酸腺苷（ATP）、O2及Mg2+存在的條件下，熒光素酶催化底物熒光素發(fā)生氧化脫羧反應(yīng)，釋放可見光能，從而實(shí)現(xiàn)生物發(fā)光（偏紅色），通過電荷耦合器件（CCD）設(shè)備等生物光學(xué)成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測，即生物發(fā)光活體成像技術(shù)（BLI）。基因、細(xì)胞和活體動物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。熒光素酶在標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)可以直接指示細(xì)胞在體內(nèi)的活動和反應(yīng)，其中ATP提供生化反應(yīng)所需的能量，即該反應(yīng)必須在活細(xì)胞內(nèi)才會存在和產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，且發(fā)光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)

這種無需激發(fā)就可發(fā)出的生物熒光，組織穿透能力強(qiáng)，靈敏度高，由于沒有激發(fā)光的非特應(yīng)性干擾，信躁比較高。

應(yīng)用

生物發(fā)光技術(shù)因具有*的靈敏度，便于對疾病動物模型微小病灶進(jìn)行檢測，而且不涉及反射性有害物質(zhì)，安全系數(shù)高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果直觀，可精確定量，重現(xiàn)性好，操作簡單，得到迅速發(fā)展。目前該技術(shù)已應(yīng)用于醫(yī)療衛(wèi)生、食品、環(huán)境等領(lǐng)域，尤其在抗腫瘤領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛，實(shí)現(xiàn)了在活體內(nèi)實(shí)時、連續(xù)地對腫瘤細(xì)胞生長、浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為的檢測，也可進(jìn)行藥物選擇及個體化治療。

由于熒光素酶的活性和穩(wěn)定性受很多因素影響，如緩沖液種類、溫度、PH、金屬離子、酶濃度及發(fā)光測定時間等，尤其PH對其影響對大，在使用中需要加以注意。

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